三花龙胆中不同部位龙胆苦苷的含量测定
摘要：目的，研究三花龙胆中不同部位龙胆苦苷的含量。方法，采用HPLC法，以甲醇-水(65：35)为流动相，274nm为检测波长。结果，三花龙胆中不同部位龙胆苦苷的含量：根>茎>叶>花。
关键词：三花龙胆 龙胆苦苷 HPLC 含量测定
龙胆入药历史悠久，早在《神农本草经》中就有关于龙胆形态及性味的初步记载，列为中品。龙胆味苦，性寒，入肝、胃经，有泻肝胆实火，除下焦湿热的功效。三花龙胆是龙胆的来源之一，主要分布在黑龙江、吉林、辽宁等地。本文采用HPLC法测定了三花龙胆中不同部位龙胆苦苷的含量，以便于合理的开发新的药用资源。
1 实验材料
1.1 仪器：Waters 515高效液相色谱仪(美国);SPD-10A紫外检测器;色谱柱(4.6mm×250mm);10μl进样器。
1.2 材料：龙胆苦苷对照品(中国药品生物制品检定所);三花龙胆购于哈尔滨市郊，经鉴定为龙胆科植物三花龙胆的干燥根、茎、叶及花;甲醇(色谱纯)。
2 含量测定
2.1 色谱条件：色谱柱Hypersil C18柱;流动相：甲醇-水(65：35);柱温：室温;流速：1ml/min;检测波长274nm。
2.2 标准曲线的绘制：精密称取龙胆苦苷对照品12.50mg，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。分别取对照品溶液2、4、6、8、10μl，测得各峰面积。以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，计算得回归方程：Y=1.38×106X+6.9×104，相关系数r=0.9996;结果表明龙胆苦胆在2.5～12.5μg呈良好线性关系。
2.3 精密度试验：取同一对照品溶液，重复进样5次，每次10μl，连续测定，峰面积RSD为1.31%。
2.4 稳定性试验：取同一对照品溶液，每20min进样一次，重复进样5次，峰面积的RSD为1.96%，表明在100min内基本稳定。
2.5 重复性试验：精密称取同一批号龙胆药材粉末0.5g(n=5)，按样品液的制备操作，其含量的RSD为1.52%。
2.6 回收率试验：精密称取已知含量的样品0.5g(n=5)，分别精密加入龙胆苦苷对照品1.80、1.90、2.00、2.10、2.20(mg)，按样品液的制备操作，测定，平均回收率为97.57%，RSD为1.81%。
2.7 样品的.含量测定
2.7.1 样品液的制备：分别称取三花龙胆的不同部位——根、茎、叶、花的干燥粉末(过4号筛)0.5g(同时另取本品粉末测定水分)，精密称定，置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，置超声波清洗中超声提取40min，取出，摇匀，室温静置30min，过滤至10ml容量瓶中，滤渣用少量甲醇分数次洗涤，洗出液并入滤液中，最后加甲醇至刻度，摇匀。
2.7.2 含量测定：吸取上述根提取液1ml置于10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度;茎、叶、花保持原浓度;分别将上述提取液微孔滤膜过滤，取10μl进样，结果如表1。
表1 不同部位龙胆苦苷的含量
样品 含量(%)
三年生花1.03
三年生叶1.92
三年生茎3.16
三年生根12.38
3 讨论
3.1 试验表明采用高效液相法进行测试，方法简便、稳定性好、灵敏度高。
3.2 三花龙胆中龙胆苦苷的含量随着采收的月份不同而不同，而且不同的部位含量也不同，地下部分根及根茎中龙胆苦苷的含量较高，是主要成分部位。地上部分含量较低，总体上含量：根>茎>叶>花。
3.3 在超声提取三花龙胆时，以超声震荡器高频震荡40min为最好，延长震荡时间，龙胆苦苷的含量未见增加，可见40min龙胆苦苷已提取完全。
参考文献
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