医学专业研究白血病课题毕业论文

时间：2021-01-15 17:03:07 医学分类医学毕业论文我要投稿

医学专业研究白血病课题毕业论文

　　1 材料

医学专业研究白血病课题毕业论文

　　白花蛇舌草由江西药都樟树中药饮片有限公司生产，批号20080701。将白花蛇舌草高速粉碎成碎片状，浸泡于盛有10倍量药材的蒸馏水的圆底烧瓶中12 h后，煎煮3次，收集滤液进行抽滤浓缩，将浓缩液置于旋转蒸发器中，滤液蒸发成粉末，再将粉末准确称重并溶于三蒸水，滤过除菌，配成浓度为220 mg/ml的'白花蛇舌草水提液备用。噻唑蓝（MTT）、二甲基亚砜（DMSO）为Sigma公司产品，RPMI1640为Gibco公司产品，小牛血清（FBS）为杭州四季青生产，凋亡检测试剂盒为北京保赛生物技术有限公司生产。

　　2 方法

　　2.1 细胞培养白血病CEM细胞株本实验室保存。培养基为含体积分数为10%的FBS的RPMI1640，并加入双抗（青霉素100 U/ml和链霉素100μg/ml）。在37℃、5% CO2、饱和湿度的培养箱（Therno Forma公司产品）中培养。取对数生长期细胞进行实验。

　　2.2 MTT比色实验将CEM细胞悬液离心（1 500 r/min、8 min），台朌蓝拒染法进行细胞计数，调整细胞终浓度为3×105/ml进行实验，将细胞悬液接种于96孔培养板，每孔190 μl，24 h后，实验组分别加入6种不同浓度的白花蛇舌草溶液（终浓度分别为0.005 12，0.025 6，0.128，0.64，3.2，16 μg/ml）10 μl，对照组不加药，微振荡，另设空白组（只有培养基，无细胞）每组6个复孔，培养于3个时间段（24，48，72 h）后，每孔加MTT（5 mg/ml）20 μl，继续培养4 h后，离心（1 500 r/min、8 min），弃上清液，每孔加DMSO 150 μl，避光微振荡，让甲臜溶解充分，置于自动酶标仪，测490 nm处的吸光度（A490）值。抑制率（%）=［（对照组A值-实验组A值）/对照组A值］×100%。

　　2.3 形态学观察白花蛇舌草作用于CEM细胞时间和浓度同MTT比色实验，在倒置显微镜下观察实验组和对照组CEM细胞的一般情况并照像；CEM细胞悬液离心涂片，Giemsa染色，油镜下观察细胞形态；取白花蛇舌草3个浓度（0.025 6，0.128，0.64 μg/ml）作用于CEM细胞，两个时间段（24，48 h）后，制成超薄切片，在透视电镜下观察细胞超微结构及凋亡小体。

　　2.4 流式细胞术（FCM）分析白花蛇舌草3个浓度（0.025 6，0.128，0.64 μg/ml），作用于CEM细胞两个时间段（24，48 h）后，细胞用PBS洗两遍，70%乙醇固定，重悬于PBS中调整细胞浓度为1×106/ml，取100 μl，加碘化吡啶（PI）1 ml，轻轻混匀置4℃冰箱30 min，上机检测（流式仪为 BECTON DTCKINSON，B.D公司产品），采用CenQuest软件上机获取10 000个细胞，ModFitlt软件分析并统计结果。

　　3 结果

　　白花蛇舌草对白血病CEM细胞生长的影响不同时间和剂量白花蛇舌草对CEM细胞生长的影响见表1。0.025 6 μg/ml的白花蛇舌草即可显着抑制CEM细胞生长，半数抑制浓度（IC50）约为0.128 μg/ml，从表1可见，白花蛇舌草对CEM细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖性，抑制率随剂量增高、时间延长而增大。

　　本实验结果显示，白花蛇舌草处理白血病CEM细胞后，能显着抑制其生长。抑制率具有时间和剂量依赖性，随着作用时间的延长，药物剂量的增大，抑制率逐步提高。光镜显示，细胞体积缩小，核浓染，细胞数量与对照组比较大为减少。电镜证明，形态学呈现典型的凋亡特征性改变，核染色质凝集，沿核膜周边聚集呈新月形，胞膜内陷包裹变性的细胞内容物成凋亡小体，这些变化是确认细胞凋亡的十分可靠的方法［5］。流式细胞术进一步说明白花蛇舌草能诱导CEM细胞凋亡。

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