注射用头孢西丁钠含量测定方法的改进
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【摘要】 目的 采用离子对色谱法测定注射用头孢西丁钠的含量，为完善注射用头孢西丁钠质量标准提供依据。方法 采用离子对色谱法，色谱柱为Agilent ZORBAX 80A Extend C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm );流动相为5 mmol·L-1氢氧化四丁基铵溶液?乙腈(体积比750∶250);检测波长254 nm;流速为1 mL·min-1。结果 头孢西丁的质量在0.310 1～3.101 0 μg范围内与峰面积线性关系良好，r=0.999 98;平均回收率为100.2%，RSD为1.05%。结论 本文方法简单、准确、重复性好，为完善注射用头孢西丁钠含量测定方法提供了依据。
【关键词】 头孢西丁钠;离子对色谱法;含量测定
头孢西丁为β?内酰胺类抗生素，由美国默沙东公司开发并于1974年上市。头孢西丁抗菌作用和抗菌谱同第二代头孢菌素，但对厌氧菌特别是脆弱拟杆菌的作用更强，对β?内酰胺酶稳定。临床上用于腹膜炎和其他腹腔内、盆腔内、妇科感染、败血症、心内膜炎、尿路感染(包括淋病)、呼吸道感染、骨关节软组织感染。采用注射用头孢西丁钠的国家标准[1,2]及相关文献[3,4]方法测定头孢西丁的含量，结果头孢西丁的理论塔板数较低，色谱峰拖尾较严重。本文采用离子对色谱(IPC)法测定头孢西丁的含量，能较大程度地提高头孢西丁的理论塔板数，改善色谱峰拖尾现象，且操作简便易行，结果重现性好，专属性强。
1 仪器与试药
岛津LC2010A/C型高效液相色谱仪，Class?VP色谱工作站,METTLER TOLEDO十万分之一电子天平。
乙腈为色谱纯，实验用水为超纯水，磷酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、10%四丁基氢氧化铵溶液为分析纯。头孢西丁对照品(批号130572?200701，质量分数为95.3%,供含量测定用，中国药品生物制品检定所)，注射用头孢西丁钠(康田制药(中山)有限公司，批号0711011、0711012、0711013)。
2 测定方法的建立
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent ZORBAX 80A Extend?C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);流动相：5 mmol·L-1氢氧化四丁基铵溶液(取10%四丁基氢氧化铵溶液13.2 mL，加水900 mL后，用1 mol·L-1磷酸溶液调节pH值至4.0，再用水稀释至1 000 mL)?乙腈(体积比750∶250);检测波长254 nm;流速为1 mL·min-1;进样量5 μL。在此条件下供试品和对照品的高效液相色谱图见图1、图2。
2.2 供试品溶液的制备[1,2]
取本品内容物，精密称取适量(约相当于头孢西丁15 mg)置50 mL量瓶中，用磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾1.0 g和磷酸氢二钠1.8 g，加水900 mL使溶解，用磷酸或10 mol·L-1氢氧化钠溶液调节pH至7.0，再用水稀释至1 000 mL，摇匀)溶解并稀释至刻度，制成每1 mL中约含头孢西丁0.3 mg的溶液，作为供试品溶液。
2.3 对照品储备液的制备
取头孢西丁对照品适量，精密称定，加磷酸盐缓冲液制成0.6 mg·mL-1的对照品储备液。
2.4 线性关系
分别精密量取质量浓度为0.620 2 mg·mL-1头孢西丁对照品储备液1、2、5、6、8 mL，加磷酸盐缓冲液稀释成质量浓度为0.062 02～0.620 2 mg·mL-1的对照品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进行测定。以质量(m)为横坐标，各自峰面积(A)为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程为
A=1.277×106m+9.774×103，r=0.999 9(n=6)
结果表明头孢西丁的质量在0.310 1～3.101 0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
取质量浓度为0.3 mg·mL-1的对照品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进行测定，重复进样5次，测得头孢西丁峰面积的RSD为0.57%，表明试验精密度良好。
2.6 稳定性试验
取同一批号供试品溶液于0、1、2、3、4、5、6 h内按“2.1”项下的色谱条件进行测定，测得头孢西丁峰面积的RSD为0.98%，表明供试品溶液在6 h内基本稳定。
2.7 重复性试验
取同一批号样品，分别按“2.2”项下的方法平行制备6份供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进行测定，头孢西丁的平均含量为94.26%，RSD为0.29%，表明方法重复性良好。
2.8 回收率试验
精密称取已知含量的样品5份，按“2.2”项下的方法制成每1 mL中约含头孢西丁1 mg的供试品溶液，分别精密吸取3 mL供试品溶液置5个20 mL的容量瓶中，再分别精密加入已知浓度的对照品溶液10 mL，加磷酸盐缓冲液溶解并稀释至刻度，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件进行测定，结果头孢西丁的平均回收率为100.4%，RSD为1.05%。见表1。表1 头孢西丁加样回收率试验
2.9 样品测定
取3批样品，按“2.2”项下的'方法制备供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进行测定，以外标法计算头孢西丁的含量。结果3批样品中头孢西丁的平均百分含量分别为94.43%,94.71%，93.59%。
3 讨 论
3.1 检测波长的选择
参照注射用头孢西丁钠的国家标准[1，2]，选择254 nm为检测波长。
3.2 流动相中氢氧化四丁基铵浓度的选择[5]
以水?乙腈(体积比750∶250)为流动相，分别考察流动相中氢氧化四丁基铵浓度依次为0 、2.5、5、10及20 mmol·L-1时对头孢西丁色谱行为的影响。结果表明，当流动相中氢氧化四丁基铵浓度为5 mmol·L-1时，头孢西丁的理论塔板数和拖尾因子最理想，故氢氧化四丁基铵浓度采用5 mmol·L-1。
3.3 流动相的pH值选择
以5 mmol·L-1氢氧化四丁基铵溶液?乙腈(体积比750∶250)为流动相，改变其pH值，考察pH值对头孢西丁的色谱行为的影响。结果表明，在pH 4.0时头孢西丁峰的理论塔板数最大及拖尾因子最小，故流动相的pH值选择4.0。