鬼针草成分的分离和鉴定

时间：2020-12-09 13:38:38 药学毕业论文我要投稿

鬼针草成分的分离和鉴定

　　下面是一篇小编精心准备的鬼针草成分的分离和鉴定的论文，欢迎各位药学专业毕业的同学阅读哦!

　　摘要：目的研究鬼针草的化学成分。方法采用乙醇提取，硅胶柱、聚酰胺柱层析分离纯化，波谱分析鉴定其结构。结果从鬼针草中得到5个化合物：异槲皮苷(Ⅰ)，异奥卡宁-7-O-β-D-葡糖苷(Ⅱ)，海生菊苷(Ⅲ)，槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷(Ⅳ)，D-甘露醇(Ⅴ)。结论5个化合物中的Ⅳ、Ⅴ是首次从本属植物中得到的。

　　关键词：鬼针草;异槲皮苷;异奥卡宁-7-O-β-D-葡糖苷;海生菊苷;槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷;D-甘露醇

　　鬼针草(Bidens bipinnata L.)是菊科鬼针草属植物，民间药用历史悠久，治疗作用广泛，疗效确切，药材资源丰富。药理研究表明，鬼针草具有降血糖、抑制醛糖还原酶(aldose reductase)、抗炎、抗肿瘤等作用并对心血管系统有作用[1]。其中，乙酸乙酯与正丁醇提取物是其抑制醛糖还原酶的有效部位，黄酮类成分是其主要的有效成分。为了查明其有效成分，为综合开发利用提供科学依据，我们研究了鬼针草乙酸乙酯提取物与正丁醇提取物的化学成分。

　　1仪器和试剂

　　U-3010紫外分光光度计，超导300 M核磁共振波谱仪(TMS为内标)，API 4000型质谱仪。薄层层析用硅胶系青岛海洋化工公司产，柱层析用硅胶系青岛化学试剂厂产，聚酰胺薄膜系上海试剂四厂产，柱层析用聚酰胺(100-200目)系台州市路桥四甲生化塑料厂产，紫外所用色谱纯甲醇系天津四友公司产，诊断试剂自制，其余所用试剂均为分析纯。鬼针草药材采自济南近郊，经本校徐凌川老师鉴别，药材样品保存于本实验室。

　　2提取与分离

　　鬼针草药材10 kg，用8倍量80 %乙醇回流提取3次，合并提取液，浓缩，除去叶绿素。依次用水饱和石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取上清液，回收溶剂后得到乙酸乙酯提取物93.5 g，正丁醇提取物122 g。乙酸乙酯提取物硅胶拌样，氯仿-甲醇梯度洗脱，得到2个部位：氯仿-甲醇416～452部分与氯仿-甲醇453～548部分。氯仿-甲醇416～452部分经聚酰胺柱层析得黄色固体粉末，再经聚酰胺柱层析，乙酸乙酯-甲醇洗脱，得化合物Ⅰ(15 mg);氯仿-甲醇453～548部分经聚酰胺柱反复层析，分别用水醇系统、乙酸乙酯-甲醇系统洗脱得化合物Ⅱ(32 mg)，Ⅲ(10.2 mg)，Ⅳ(26 mg)。正丁醇提取物硅胶拌样，氯仿-甲醇梯度洗脱，氯仿-甲醇422～455部分析出无色雪花状结晶，经丙酮-水重结晶，得化合物Ⅴ(180 mg)。

　　3结构鉴定

　　化合物Ⅰ：黄色无定形粉末(乙酸乙酯-甲醇)，mp 250～252 ℃，Molish反应阳性，HCl-Mg粉反应阳性。其1H-NMR(DMSO-d6)谱中δ: 12.64(1H，s)示黄酮母核存在5-OH;芳香区 7.57(2 H，d，J=9 Hz，H-2’，6’)，6.83(1 H，d，J=8.7 Hz，H-5’)表示B环为3’4’二取代;6.38(1 H，s，H-8)，6.19(1 H，s，H-6)表示A环为5,7二取代，5.46(1 H，d，J=6.9 Hz，H-1”)为糖的端基质子信号，其偶合常数(J=6.9 Hz)表明苷键为β构型。13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ：156.34(C-2)，133.29(C-3)，177.43(C-4)，161.25(C-5)，98.72(C-6)，164.70(C-7)，93.53(C-8)，156.14(C-9)，103.93(C-10)，121.15(C-1’)，115.22(C-2’)，144.84(C-3’)，148.50(C-4’)，116.21(C-5’)，121.62(C-6’)，糖部分：100.83(C-1”)，74.10(C-2”)，76.50(C-3”)，69.93(C-4”)，77.62(C-5”)，60.98(C-6”)。综合以上数据，其1H-NMR与13C-NMR数据与文献报道的异槲皮苷数据[2]对照，二者基本一致，确定化合物Ⅰ为异槲皮苷，即槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡糖苷。

　　化合物Ⅱ：土白色粉末(乙酸乙酯-甲醇)，mp 242～245 ℃，Molish反应阳性，HCl-Mg粉反应阳性。其1H-NMR(DMSO-d6)谱中，δ：5.38(1 H，dd，J=12 Hz，J=3 Hz，H-2)，2.65(1 H，dd，J=17.0 Hz，J=3 Hz，H-3a)，3.11(1 H，dd，J=16.8 Hz，J=3 Hz，H-3b)，为二氢黄酮苷元C环上的1个2位的质子和2个3位的质子。7.22(1 H，d，J=9 Hz，H-5)，6.85(1H，d，J=8.7 Hz，H-6)，为二氢黄酮类化合物A环上的质子，其偶合常数可知A环为邻位取代。6.91(1 H，s，H-2’)，6.76(1 H，s，H-6’)，6.74(1 H，s，H-5’)，为B环上二取代后的质子。13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ：79.29(C-2)，43.45(C-3)，191.21(C-4)，118.06(C-5)，108.90(C-6)，150.52(C-7)，135.11(C-8)，150.75(C-9)，116.55(C-10)，129.87(C-1’)，114.52(C-2’)，145.66(C-3’)，145.17(C-4’)，115.28(C-5’)，116.55(C-6’)，糖部分：101.44(C-1”)73.19(C-2”)，75.69(C-3”)，69.65(C-4”)，77.27(C-5”)，60.61(C-6”)。将其1H-NMR与13C-NMR数据与文献报道的异奥卡宁-7-O-β-D-葡糖苷数据[3]对照，二者基本一致，确定化合物Ⅱ为异奥卡宁-7-O-β-D-葡糖苷。

　　化合物Ⅲ：橙黄色粉末(乙酸乙酯-甲醇)，mp 202～205 ℃，Molish反应阳性，遇碱变红色，HCl-Mg粉反应阴性。其1H-NMR谱中，芳香区5个氢的化学位移与偶合常数提示A环5，7位二取代，B环3’，4’二取代。1H-NMR(300 MHz，DMSO-d6)谱中 δ：7.49(1 H，s，H-2’)，7.32(1 H，d，J=8.4 Hz，H-6’)，7.15(1H，d，J=8.1 Hz，H-4)，7.04(1 H，d，J=8.4 Hz，H-5)，6.84(1 H，d，J=8.4 Hz，H-5’)，6.69(1 H，s，H-10)，4.91(1 H，d，J=6.9 Hz，H-1”)，3.15-3.73(糖上质子)。13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6) δ：145.68(C-2)，182.57(C-3)，113.681(C-4)，112.13(C-5)，154.30(C-6)，133.36(C-7)，152.49(C-8)，117.14(C-9)，112.88(C-10)，123.26(C-1’)，118.28(C-2’)，145.48(C-3’)，148.55(C-4’)，116.05(C-5’)，124.94(C-6’)，糖部分：101.72(C-1”)，73.26(C-2”)，75.82(C-3”)，69.64(C-4”)，77.34(C-5”)，60.63(C-6”)。将其1H-NMR与13C-NMR数据与文献报道的海生菊苷数据[4]对照，二者基本一致，确定化合物Ⅲ为海生菊苷，即6-O-β-D-吡喃葡糖基-7，3’，4’-三羟基橙酮。

　　化合物Ⅳ：黄色颗粒状粉末(乙酸乙酯-甲醇)，mp 245～247 ℃。Molish反应阳性，HCl-Mg粉反应阳性。ESI-MS m/z: 465(M+1)+为分子离子峰，301为掉一分子葡萄糖的`碎片峰。1H-NMR(DMSO-d6)谱中δ：12.52(1H，s)表示黄酮母核存在5-OH;δ7.71(1 H，S，H-2’)，7.54(1 H，d，J=8.4 Hz，H-6’)，6.88(1 H，d，J=8.7 Hz，H-5’)表示B环为3’,4’二取代，较高场的δ 6.76(1 H，s，H-8)，6.41(1 H，s，H-6)表示A环为5,7二取代;δ 5.07(1 H，d，J=6.9 Hz，H-1”)为糖的端基质子信号，其偶合常数(J=6.9 Hz)说明苷键是β构型。13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6) δ：147.58(C-2)，136.13(C-3)，176.04(C-4)，160.38(C-5)，98.75(C-6)，162.69(C-7)，94.24(C-8)，155.74(C-9)，104.67(C-10)，121.80(C-1’)，115.60(C-2’)，145.10(C-3’)，147.97(C-4’)，115.40(C-5’)，120.05(C-6’)，糖部分：99.84(C-1”)，73.13(C-2”)，76.41(C-3”)，69.52(C-4”)，77.16(C-5”)，60.61(C-6”)。综合以上数据，化合物Ⅳ的1H-NMR与 13C-NMR数据与文献报道的槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷数据[2,5]对照，二者基本一致，确定化合物Ⅳ为槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷。

　　化合物Ⅴ：无色针晶(丙酮-水)，mp 166.5～167.5 ℃，Molish反应阳性，微甜，易溶于水，难溶于低极性有机溶剂。IR(KBr)cm-1：3 253(OH，br)，2 935(CH2对称伸缩振动)，1 400(CH2对称弯曲振动)，1 026(C-O伸缩振动)，933(-OH面外弯曲振动)。由1H-NMR(DMSO-d6)谱数据可知，处于较低场的δ：4.41(2 H，d，J=5.1 Hz，C2,5-O-H)，4.32(2 H，t，J=5.4 Hz，C1,6-O-H)，4.13(2 H，d，J=7.2 Hz，C3,4-O-H)，分别是醇羟基的氢质子，与碳上所连质子明显偶合，而处于较高场3.3～3.6处的质子峰，推测为其余氢质子的堆积峰，对照化合物Ⅳ氢谱数据与文献报道D-甘露醇的氢谱数据[6]基本一致。结合13C-NMR(DMSO-d6)谱可知分子结构具有对称性，13C-NMR δ：71.31(2C，C-3，C-4)，69.66(2C，C-2，C-5)，63.90(2C，C-1，C-6)，与文献报道D-甘露醇13C-NMR数据[7]基本一致，综合上述数据，确定化合物Ⅴ为D-甘露醇。

　　参考文献

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　　[3]李帅，匡海学，冈田嘉仁，等. 鬼针草有效成分的研究(Ⅱ)[J]. 中草药，2004，35(9)：972-975.

　　[4]Yutaka S. New aurone glucosides and phenylpropanoid glucosides from Bidens pilosa[J]. Chem Pharm Bull, 1991,39(3): 709-711.

　　[5]谭成玉，胡建恩，王焕弟，等. 植物雅龙果的化学成分研究[J]. 中国药学杂志，2005，40(24)：1859-1861.

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