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气相色谱法测定角鲨烯软胶囊中角鲨烯含量
气相色谱法测定角鲨烯软胶囊中角鲨烯含量【1】
【摘要】 目的 建立角鲨烯软胶囊中角鲨烯的气相色谱测定方法。
方法 采用气相色谱内标法，FID检测器，硅酮OV-17填充柱(2m×3.2mm)，柱温250℃，进样口温度280℃，监测器温度300℃。
结果 角鲨烯在1.2～19.2μg内呈良好的线性关系，加样回收率为99.8%。
结论 该方法简单可靠，精度高，适用于角鲨烯软胶囊中角鲨烯的含量测定。
【关键词】 角鲨烯 气相色谱法
角鲨烯(squalene)，又名鲨烯，鲨萜，是一种高度不饱和烃类化合物，具有提高体内超氧化物歧化酶活性、增强机体免疫力、抗衰老等多种生理功能[1]，因此被广泛应用于医药、化妆品等相关领域[2]。
本文以气相色谱内标法检测角鲨烯含量，用现代分析技术建立了角鲨烯质量控制方法。
1 仪器与试药
岛津GC-14C气相色谱仪;电子分析天平(MettlerToledo AB204-N);角鲨烯(中国药品生物制品检定所，批号140721-200601);角鲨烯软胶囊(北京赛鲨力生物技术研究中心，批号071201);正己烷为分析纯。
2 方法和结果
2.1 色谱条件
色谱柱为硅酮OV-17填充柱(2m×3.2mm);检测器为FID检测器;柱温：250℃;进样口温度为280℃;检测器温度为300℃;载气为氮气，流速为50ml·min-1;空气流速50ml·min-1;氢气流速50ml·min-1;进样量3μl。
2.2 溶液的制备
2.2.1 内标溶液的制备
精密称取鲨烷0.0604g，置于100ml容量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液。
2.2.2 对照品溶液的制备
精密称取角鲨烯对照品0.2002g，置于25ml容量瓶中，加内标溶液稀释置刻度，摇匀，作为对照品贮备液。
精密吸取3.0ml对照品贮备液，置10ml的量瓶中，加内标溶液稀释置刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备
精取角鲨烯软胶囊内容物0.0252g，置于10ml的量瓶中, 加内标溶液稀释置刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.2.4 阴性对照溶液的制备
取内标溶液作阴性对照溶液。
2.3 方法学考察
2.3.1 专属性试验
照上述色谱条件，取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各3μl，分别注入色谱仪。
供试品色谱图中，在与对照品色谱图相应的位置上，显相同保留时间的色谱峰，阴性对照溶液在此保留时间内无色谱峰，本测定无干扰。
角鲨烯出峰时间约9.873min，内标出峰时间约4.265min。
见图1。
2.3.2 线性关系考察
分别精密吸取对照品贮备液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0ml置10ml的容量瓶中, 各加入内标溶液稀释置刻度，摇匀，依次进样3μl，测定色谱峰面积，以对照品与内标峰面积积分值的比作为横坐标(X), 对照品溶液溶质的质量(mg)作为纵坐标(Y), 进行线性回归，得回归方程Y=0.5947X+0.0473, r=0.9994，结果表明角鲨烯在进样量范围1.2～19.2μg内呈良好的线性关系。
2.3.3 精密度试验
取供试品溶液，连续重复进样6次，每次3μl，以供试品溶液与内标溶液峰面积积分值的比值计算相对标准偏差，测得平均值为0.9032，RSD=0.66%，表明精密度良好。
2.3.4 重现性试验
称取同一批号的供试品6份。
各约25.0mg，依上述2.1项色谱条件进行测定，以角鲨烯的百分含量(g/g)计算相对标准偏差，平均含量为99.82%，RSD=0.58%，重复性良好。
2.3.5 稳定性试验
精密吸取供试品溶液3μl，经过0、1、2、3、4、5h分别依上述2.1项色谱条件进行测定，以供试品溶液与内标溶液峰面积积分值的比值计算相对标准偏差，测得平均值为0.9149， RSD=1.16%，结果表明5h内样品稳定性良好。
2.3.6 回收率试验
分别精密称取已测定含量的角鲨烯软胶囊内容物6份，每份约12.5mg，加对照品贮备液2ml，各加内标溶液稀释置刻度，摇匀。
按上述2.1项色谱条件定含量，计算回收率，平均回收率为99.8%，RSD=1.22%。
2.4 样品含量测定
取供试品溶液和对照品溶液各3μl, 注入气相色谱仪，按照上述色谱条件进行测定，内标法计算样品含量，结果供试品中角鲨烯平均含量99.8%。
通过检测供试品装量，计算出每粒供试品中角鲨烯平均含量为0.1404g。
3 讨论
3.1 本实验采用气相色谱内标法对角鲨烯含量进行测定，并进行了方法学考察。
实验结果表明本方法分离度高，方法可行，结果准确，可有效地控制角鲨烯软胶囊的质量。
3.2 本实验方法也为含角鲨烯成分的药品及保健品质量标准建立提供参考。
【参考文献】
[1]顾觉奋，牛佳.角鲨烯合成酶抑制剂降血脂作用及机制的研究进展[J].药学进展,2007，37(1)：15-20
[2]许瑞波,刘玮炜.角鲨烯的制备及应用进展[J].山东医药，2005，45(35)：69-70
气相色谱法测定市售舒心通脉胶囊中冰片的含量【2】
【摘要】 目的建立测定舒心通脉胶囊中冰片含量的气相色谱方法。
方法 氢火焰离子化检测器(FID),柱温为150℃,色谱柱为10%PEG-20M填充柱(3 mm×2 m),正十五烷为内标物。
结果 冰片在0.1～2.5 mg/ml范围内,具有良好的线性关系。
结论 气相色谱法可用于舒心通脉胶囊中冰片的质量控制。
【关键词】 气相色谱法;舒心通脉胶囊;冰片;含量测定
作者单位:136000吉林省四平市妇婴医院(付梅);中国药科大学07级414班(王倩)
舒心通脉胶囊是由马齿苋、千年健、川芎、丹参、降香、冰片组成的复方制剂。
原标准中对川芎进行了HPLC法的含量测定。
冰片易挥发,在存储中含量容易下降,该品种冰片只作为鉴别项,并未加入含量测定,为更有效控制该制剂的质量,本文采用气相色谱法测定了舒心通脉胶囊中冰片的含量,获得满意的结果。
1 仪器与试药
1.1 仪器 岛津GC-14C气相色谱仪。
1.2 试药 冰片对照品(批号:110743-200504),正十五烷内标物(批号:111677-200401)由中国药品生物制品检定所提供;试剂均为分析纯。
舒心通脉胶囊为市售样品,阴性样品为自制。
2 方法和结果
2.1 色谱条件 检测器:氢火焰离子化检测器(FID);柱温:150℃;进样口温度:180℃;检测器温度200℃;色谱柱:10%PEG-20M填充柱(3 mm×2 m);载气:高纯氮气;流速:45 ml/min,氢气:45 ml/min,空气:500 ml/min。
进样体积:1μl。
2.2 溶液的制备
2.2.1 内标溶液的制备 取正十五烷适量,精密称定,加乙酸乙酯制成每1 ml含10 mg的溶液,作为内标溶液。
2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取冰片对照品50 mg,置10 ml量瓶中,加乙酸乙酯稀释至刻度,摇匀。
精密量取2 ml,置10 ml量瓶中,精密加入内标溶液1 ml,加乙酸乙酯稀释至刻度,摇匀,即得。
2.2.3 供试品溶液的制备 取本品内容物50 mg,精密称定,置10 ml量瓶中,精密加入内标溶液1 ml,加乙酸乙酯稀释至刻度,密塞,振摇,过滤,取续滤液,即得。
2.2.4 阴性对照溶液的制备 取不含冰片的阴性样品,按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。
2.3 系统适用性试验 吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性溶液各1 μl,分别注入气相色谱仪,龙脑与异龙脑的分离度>1.5,理论板数按正十五烷计为3000以上,阴性对照溶液无干扰。见图1、2、3。
图1 对照品,由左往右依次为正十五烷、异龙脑、龙脑图2 供试品图3 阴性样品
2.4 线性关系考察 精密吸取冰片对照品贮备液0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、5.0 ml分别置于10 ml量瓶中,精密加入内标液各1 ml,加乙酸乙酯稀释置刻度,摇匀。
分别吸取上述溶液各1μl注入气相色谱仪,进行测定。
以对照品浓度(X)为横坐标,冰片与正十五烷峰面积的比(Y)为纵坐标,计算标准曲线,得回归方程为:Y=6.2747X-0.4522,r=0.9999。
结果表明,冰片在0.1～2.5 mg/ml范围内,具有良好的线性关系。
2.5 精密度试验 吸取供试品溶液1 μl,注入气相色谱仪,连续进样5次,按冰片与正十五烷峰面积的比计算结果,RSD为0.55%。
2.6 稳定性试验 取同一批号本品的供试品溶液,按上述测定方法分别于配制后0、2、4、6、8 h,注入气相色谱仪,按冰片与正十五烷峰面积的比计算,RSD为0.87%。
结果表明本法在8 h内供试品溶液稳定。
2.7 重复性试验 取同一批号本品5份,分别按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液,按上述测定方法测定,冰片平均含量为125 mg/g,RSD为1.08%,结果表明本法重复性好
2.8 回收率试验 取已知含量为127 mg/g的样品5份,各0.1 g,精密称定,分别精密加入浓度为10.38 mg/ml冰片对照品溶液各1 ml,按供试品溶液制备方法制备供试品溶液,按上述测定方法测定含量,计算平均加样回收率为99.15%,RSD为1.32%。
2.9 样品测定 取三批样品各约50 mg,精密称定,按供试品制备方法制备供试品溶液,照上述测定方法测定,计算,即得。表1
三批样品制备供试品溶液(mg/g)
批号 080702 080703 080704
冰片126127123
3 讨论
柱温是色谱条件的重要参数,在选用好的柱子基础上,对柱温进行了试验分析,结果在150℃时色谱图最佳。
在建立的色谱条件下,冰片分离成龙脑峰和异龙脑峰而形成双峰,含量计算时,取两峰面积之和计算。
从各项数据来看,本方法准确、稳定、重现性好,而且快速、实用,完全能够满足对冰片含量分析的要求。
参 考 文 献
[1] 魏学冰.气相色谱法测定肤疡宁软膏中冰片的含量.中成药,2004,26(1):76.
[2] 武谷,周家骅.速效心痛丸中冰片与丹皮酚的含量测定.中成药,2000,22(9):623.
[3] 方建国,杜光,王文清.冰黄栓中冰片和大黄素的含量测定.中国医院药学杂志,2001,21(7):409.
气相色谱法测定新疆昆仑雪菊挥发油中柠檬烯的含量【3】
[摘要] 目的 建立新疆昆仑雪菊中柠檬烯含量的测定方法。
方法 采用气相色谱法，Rtx-5石英毛细管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm);程序升温：50℃保持5 min，以10℃/min升至230℃，保持10 min;载气流量：18.30 mL/min;柱压：100 kPa;进样口温度：250℃;分流比：10∶1;进样量：1 μL。
结果 柠檬烯在41.90~251.40 μg/mL范围内线性关系良好(r = 0.9996，n = 6)，平均回收率为102.72%，RSD为1.35%(n = 9)。
结论 本实验方法可靠，重复性好，专属性强，可用于雪菊挥发油中柠檬烯的含量测定，以控制雪菊挥发油的质量。
[关键词] 雪菊;挥发油;柠檬烯;气相色谱法
昆仑雪菊(Kunlun Chrysanthemum)采自新疆昆仑山北麓，维吾尔语名为“古丽恰衣”(Gulqai)，记载于新疆植物志，与雪莲齐名的珍贵维药之一[1]。
经新疆医科大学药学院天然药物化学/生药学教研室帕丽达・阿布力孜教授鉴定为菊科多年生草本植物菊两色金鸡菊(Golden Chrysanthemum)同属近缘植物昆仑雪菊的头状花序。
《新华本草纲要》中记载两色金鸡菊全草名曰蛇目菊，具有清热解毒，活血化瘀之功效，主治燥热烦渴、高血压、高血脂、高血糖等病症[2]。
经研究发现，昆仑雪菊确有降血压、降血脂和降血糖的功效[3-5]，曹燕等[6]采用大鼠体外胸主动脉血管环标本相同模型对雪菊乙醇提取物的血管环舒张作用机制进行探讨，说明雪菊乙醇提取物有降血压的作用。
梁淑红等[7]采用高血脂症小鼠模型，探讨乙醇总提取物和石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇各极性部位对血脂的影响，结果说明雪菊乙醇总提取物和各极性部位均有明显的降血脂作用。
张淑鹏等[8]采用α-葡萄糖苷酶体外活性抑制模型，测定雪菊的5种提取物对葡萄糖苷酶抑制活性，结果显示这5种提取物对α-葡萄糖苷酶活性有较强的抑制作用，抑制活性均高于阿卡波糖。
其还具有健脾胃、理肺、生津、养血、补肾的作用[7-8]，挥发油是具有广泛生物活性的一类重要成分，是古代医疗实践中较早注意到的药物，多具有祛痰、止咳、驱风、健胃、解热、镇痛、抗菌消炎等作用[9-10]。
有学者用气相色谱-质谱联用(GC-MS)对新疆昆仑雪菊中的挥发油进行分析，从中共检测出23个色谱峰，并初步鉴定了其中的22种化合物。
雪菊挥发油中的成分复杂，数量较多，但有的含量较低，其中柠檬稀的含量最高，达到了63.50%，因此本实验通过超声乙醇回流法提取新疆昆仑雪菊挥发油，并对挥发油中柠檬烯的含量进行测定，为制定新疆昆仑雪菊质量标准提供依据。
1 仪器与试药
2010岛津气相色谱仪，KQ-200KDE高功率数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司);柠檬烯对照品(上海源叶生物科技有限公司，批号：20110723，纯度达98%以上);乙醇为分析纯;Mettler-Toledo电子天平(AB135-S，d=0.01/0.1 mg);DFT-200型手提式高速中药粉碎机(温冷市大德重要机械有限公司)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为石英毛细管柱Rtx-5(30 m×0.25 mm，0.25 μm);程序升温：50℃保持5 min，以10℃/min升至230℃，保持10 min;载气流量：18.30 mL/min;柱压：100 kPa;进样口温度：250℃;分流比：10∶1;进样量：1 μL。
2.2 对照品溶液的制备
精密吸取10 μL柠檬烯的标准品，定容至10 mL容量瓶中，摇匀静置，配成含0.838 μg/mL的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取2 g(±0.05 g)雪菊粉末，加10 mL乙醇，至100 mL锥形瓶中混匀，将锥形瓶放入超声波设备并连接回流装置，在超声功率为140 W，超声温度为55℃，超声时间30 min条件下进行超声处理，补足重量，过滤，即得。
2.4 系统适应性试验
在上述色谱条件下，分别吸取对照品溶液、供试品溶液各1 μL，注入气相色谱仪，得色谱图。
结果显示供试品中各峰与待测成分分离良好。
见图1。
2.5 线性关系的考察
精密量取柠檬烯(浓度为4.19 mg/mL)对照品溶液0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60 mL，置于10 mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取1 μL，注入气相色谱仪，进行测定;以柠檬烯进样量对色谱峰面积值作标准曲线。
计算得回归方程Y = 179 732X-9353.5，其中X是柠檬烯的浓度(μg/mL)，Y是每个柠檬烯的浓度所对应的峰面积，表明柠檬烯在41.9~251.4 μg/mL范围内呈良好线性关系，r = 0.9996。
2.6 精密度试验
2.6.1 日间精密度取柠檬烯对照品低浓度(41.90 μg/mL)、中浓度(125.70 μg/mL)、高浓度(167.60 μg/mL)对照品溶液，分别重复进样6 d，测定峰面积，计算日间精密度RSD分别为2.70%(n = 6)、1.60%(n = 6)、2.50%(n = 6)。
2.6.2 日内精密度取柠檬烯对照品低浓度(41.90 μg/mL)、中浓度(125.70 μg/mL)、高浓度(209.50 μg/mL)对照品溶液，分别重复进样6次，测定峰面积，计算日内精密度RSD分别为0.40%(n = 6)、1.20%(n = 6)、1.80%(n = 6)。
2.7 稳定性试验
精密称取2 g(±0.05 g)雪菊粉末，按供试品溶液制备方法制备后，在0、2、4、6、8、12、24 h进行测定，测定结果表明，提取液制成测定液后稳定性逐渐变差，须在30 min内尽快测定为宜。
提取液放置1 d后RSD值为3.6%，因此应采用新鲜的提取液。
2.8 重复性试验
取雪菊粉末，精密称取6份，按供试品溶液制备方法制备后进行测定，RSD为2.13%，表明该方法重复性良好。
2.9 回收率试验
取雪菊样品粉末(研磨，过三号筛)，共9份，分为三组，按低、中、高浓度分别加入柠檬烯对照品，分别在3个100 mL锥形瓶中混匀，并将锥形瓶放入超声波设备，连接回流装置，在超声功率为140 W，超声温度为55℃，超声时间30 min条件下进行超声处理，补足重量，过滤，进样1 μL，得低、中、高浓度平均回收率(n = 12)分别为101.23%、103.43%、103.50%，平均为102.72%，RSD为1.35%，结果见表1。
表1 加样回收率实验结果(n = 9)
2.10 样品的测定
2.10.1 不同产地新疆昆仑雪菊挥发油中柠檬烯的含量测定精密称取8个产地(n = 3)雪菊粉末2 g(±0.05)，按供试品溶液制备方法制备后进行测定，结果见表2。
表2 不同地区新疆昆仑雪菊挥发油中柠檬烯的含量(n = 3)
2.10.2 雪菊不同部位柠檬烯的含量的测定精密称取雪菊各个部位粉末2 g(±0.05 g)，按供试品溶液制备方法制备后进行测定，结果见表3。
表3 新疆昆仑雪菊不同部位挥发油中柠檬烯的含量(n = 3)
3 讨论
新疆昆仑雪菊属菊科金鸡菊属草本植物，生长在海拔3000 m高的昆仑山一带[7]，有较丰富的野生资源，这特殊的地理环境使雪菊化学成分的类型和有效成分的含量跟其它的菊花品种可能有所差异。
长期以来，昆仑雪菊被当地居民当花茶饮用，新疆维吾尔医院也作为一种维药材使用，具有清热解毒、活血化瘀和胃健脾之功，可治疗燥热烦渴、高血压、胃肠不适、心慌、胃肠不适、食欲不振、痢疾及疮疖肿毒，具有广阔前景和研究价值[9-12]。
本实验采用超声乙醇回流法[13-15]提取新疆昆仑雪菊中的挥发油，并对样品的前处理进行了考察，分别对超声提取溶剂、料液比、超声功率，时间，温度进行了单因素考察，通过正交实验及验证后确定用体积分数100%乙醇，按1∶5的料液比，在超声功率为140 W，超声温度为55℃，超声时间30 min为样品前处理方法，并以柠檬烯的含量作为评价指标，采用气相色谱法建立其含量的测定方法，参考文献[10，16]色谱条件，对柱温的升温程序(进口温度、载气流速、分流比等)进行了优化，确定色谱条件，进行了方法学考察。
通过对测定结果进行比较，表明该方法精密，稳定，重现性良好，结果准确可靠，可用于挥发油中柠檬烯的含量测定，为制定新疆昆仑雪菊质量标准提供依据。
运用上述方法对不同产地的昆仑雪菊挥发油中的柠檬烯进行了含量测定，结果表明不同产地昆仑雪菊挥发油中柠檬烯的含量有很大不同，其原因可能有①海拔不同会对昆仑雪菊品质产生影响。
②生长的土壤、环境、气候不同，对昆仑雪菊挥发油品质产生影响。
③采集时间的不同等因素均可影响到雪菊的品质。
同时对昆仑雪菊不同部位进行挥发油提取并测定柠檬烯的含量，结果表明花中的柠檬烯含量最多，其花萼与茎中柠檬烯的含量甚少。
本实验可为今后昆仑雪菊的质量控制和化学成分的分离鉴定研究提供实验依据，同时为进一步的开发和利用昆仑雪菊奠定一定的基础。
[参考文献]
[1]安争夕，魏岩，地立夏提，等.新疆植物志(第5卷)[M].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：93.
[2]江苏省植物研究所.新华本草纲要[M].上海：上海科学技术出版社，1988：22-25.
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[4]木合布力・阿布力孜，张燕，景兆均，等.新疆昆仑雪菊化学成分初步定性研究[J].新疆医科大学学报，2010，33(6)：628-630.
[5]梁淑红，刘晓燕.金鸡菊提取物降血脂作用的动物实验研究[J].农垦医学，2009，31(6)：495-498.
[6]曹燕，庞市宾，徐磊，等.金鸡菊提取物对血管环舒张作用的探讨[J].农垦医学，2011，33(2)：148-152.
[7]梁淑红，哈木拉提，庞士宾，等.金鸡菊提取物降压化学成分实验研究[J].时珍国医国药，2010，21(7)：1619-1621.
[8]张淑鹏，李琳琳，木合布力・阿布力孜，等.昆仑雪菊提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用[J].现代生物医学进展，2011，11(6)：1055-1057.
[9]刘勇民，沙吾提・依克木.维吾尔药志[M].乌鲁木齐：新疆人民出版社，1986:290.
[10]王艳，张彦丽，阿依吐伦・斯马义.分光光度法测定新疆昆仑雪菊中总黄酮的含量[J].新疆医科大学学报，2011， 34(5)：817-819.
[11]张彦丽，阿依吐伦・斯马义.GC-MS对昆仑雪菊挥发油成分的研究[J].新疆医科大学学报，2010，33(11)：1299-1300.
[12]刘伟新，邓继华，徐鸿.一种金鸡菊花的生药学研究[J].中国民族医药杂志，2009，15(1)：24-25.
[13]马强，何璐，王玉龙，等.小茴香挥发油超声波提取工艺优化及抗菌活性研究[J].安徽农业科学，2007，35(7)：1912-1913.
[14]刘职瑞，刘文庸，吴豪，等.水蒸气蒸馏与乙醚超声萃取牡丹皮挥发油的比较研究[J].药学实践杂志，2010，28(4)：265-266，270.
[15]蒋红梅，卢向阳，方俊，等.石香薷挥发油提取工艺研究[J].中药材，2007，30(9)：1135-1139.
[16]余启荣，高柏丽，胡玉霞，等.GC法测定灵丹草油中β-芹子烯的含量[J].中国实验方剂学，2010，16(9)：44-45.
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