东北藜蒿提取物体外抗菌作用的初步研究论文
目的：研究东北藜蒿提取物的体外抗菌作用。方法：采用试管稀释法测定东北藜蒿提取物水煎剂、醇提物对13种临床常见病原菌的最低抑菌浓度(MIC)，判定抗菌效果。结果：东北藜蒿水煎剂、醇提物对13种临床常见病原菌均有不同程度的抗菌作用。结论：东北藜蒿提取物在体外有一定抗菌作用。
【ABSTRACT】 Objective:To investigate the antibacterial function of Artemisia selengensis turcz extract in northeast china in vitro.Methods:The tube broth methods were used to determin the minimal inhibition concentration(MIC)for 13 common bacteria strains.Results:It was shown that Chinese Medicine in northeast china exerted different antibacterial effects on the 13 common bacteria strains.Conclusion:Artemisia selengensis Turcz.in northeast china holds antibacterial effects on common pathogens in vitro.
【KEY WORDS】 Artemisia selengensis Turcz,The Minimal Inhibition Concentration,Microbial Sensitivity Tests
藜蒿为菊科植物，又称蒌蒿，在我国主要生长在鄱阳湖一带，东北、华北和中南地区均有野生分布，含有丰富的人体必需的微量元素［1］。远在唐代，孙思邈就记载了藜蒿的药用价值“藜蒿性平，味甘辛”,具有健体补虚、清心解毒、利胆退黄作用，主治肝胆湿热、脾虚纳滞等病症。近年来研究表明藜蒿提取物具有降压作用［2］，也有少量报道其有不同程度抑菌作用［3］。为了开发藜蒿的药用资源，为临床应用提供科学依据，我们对东北藜蒿的体外抗菌作用进行了初步研究。
1 材料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 药材 干燥藜蒿原植物产于东北。
1.1.2 菌种 乙型副伤寒沙门菌，铜绿假单胞菌，大肠埃希菌，表皮葡萄球菌，痢疾志贺菌，鲍曼不动杆菌，嗜麦芽假单胞菌，肺炎克雷伯氏菌，金黄色葡萄球菌，变形杆菌，而茎平滑念珠菌，热带念珠菌，白色念珠菌，均购自北京生物制品检定所。
1.1.3 培养基
1.1.3.1 液体培养基 Mueller-Hinton(MH)肉汤。
1.1.3.2 固体培养基 Mueller-Hinton(MH)琼脂，沙氏培养基。
1.1.4 仪器 721分光光度计，培养箱，无菌超净工作台。
1.2 方法
1.2.1 藜蒿水煎剂的制备 中药煎制：参照陈奇的方法［4］进行，取藜蒿粉碎，加蒸馏水浸泡30min后加热煮沸。开始用强火，沸腾后改用文火，保持微沸30min至1h，搅拌、趁热过滤。药渣再加蒸馏水煮沸30min，滤过。合并滤液，浓缩成含生药2g/mL的药液，灭菌后备用。
1.2.2 藜蒿醇提物的制备 参照陈奇的方法［4］进行，用60%乙醇提取，浓缩成含生药2g/mL的药液，灭菌后备用。
1.2.3 菌液的`制备
1.2.3.1 标准比浊管配制 0.048mol/L(1.175%)氯化钡0.5mL,加0.18mol/L(1%)硫酸溶液99.5mL，混匀后用530nm波长比色调整其浊度，使吸收值为0.1。相当于5×(107～108CFU/mL)。其操作参考医学微生物学实验指导［5］。
1.2.3.2 实验菌液制备 将实验所用13种菌的培养物（菌落）用无菌生理盐水制成菌液，浓度相当于0.5麦氏比浊。
1.2.4 藜蒿提取物（药液）的稀释 藜蒿提取物采用试管稀释法［4］，每一组实验取试管5支，分别标记1、2、3、4、5，共13组，用MH肉汤（细菌）、沙氏液体（真菌）倍比稀释药液至待测的浓度，依次为1.5g/mL、1.0g/mL、0.5g/mL、0.25g/mL、0.125g/mL。另取3 支试管作为对照管，分别标记为“MH 肉汤对照”,“药物原浓度对照”,“测试菌生长对照”。
1.2.5 实验方法 药液稀释好之后将13种实验菌液分别加入13组含药液培养基的试管中，除MH肉汤对照管外每管0.1mL菌液。所有试管放置温箱内37℃，培养24h后观察结果，在对照管符合要求的情况下，将各实验管的培养物接种至相应培养基的琼脂平板上，确定是否有细菌生长。37℃，24h观察结果，以琼脂平板上完全无细菌生长的药物最高稀释度为最低抑菌浓度（MIC）。
2 结果
2.1 东北藜蒿水煎剂对13种病原菌的最低抑菌浓度（MIC）见表1。表1 东北藜蒿水煎剂对13种病原菌的最低抑菌浓度注：有病原菌生长 “+” 无病原菌生长“-”
结果显示：东北藜蒿水煎剂对细菌和真菌均有不同程度的抑菌作用，对鲍曼不动杆菌抑菌作用较强，MIC为0.25g/mL。对真菌中热带念珠菌抑菌效果较好，MIC为1.0g/mL，重复性实验结果一致。
2.2 东北藜蒿醇提物对13种病原菌的最低抑菌浓度见表2。表3 东北藜蒿醇提物对13种病原菌的最低抑菌浓度结果显示：东北藜蒿醇提物对表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌抑菌作用很强，MIC为0.125g/mL。对真菌中近平滑念珠菌有较强抑菌效果，MIC为0.25g/mL。
3 讨论
实验结果表明东北藜蒿水煎剂及醇提物均有体外抗菌作用。与已报道的藜蒿水煎剂对大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，痢疾杆菌的MIC值［4］不完全相同，与我们实验的其它藜蒿MIC值也不同，可能因为药材产地不同导致药材化学成分含量不一致，以致抗菌效果也不同。
实验结果表明东北藜蒿水煎剂及醇提物对13种病原菌抑菌作用不完全相同。水煎剂对鲍曼不动杆菌和热带念珠菌抑菌效果较好，醇提物对表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌、近平滑念珠菌的抑菌作用较强。在临床上真菌感染及其治疗越来越受到关注，中药抗真菌研究及治疗倍受关注。本实验表明东北藜蒿醇提物对近平滑念珠菌有一定抑制作用，MIC为0.25g/mL，藜蒿抗念珠菌感染有潜在开发价值。东北藜蒿醇提物对表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌的MIC为0.125g/mL，是否可用于临床抗感染治疗有待于进一步研究。
本实验在体外进行，在体内能否达到有效抗菌浓度，控制感染，有待继续探讨，还有必要对东北藜蒿水煎剂、醇提物的抗菌成分及机理作进一步研究，为开发和综合利用该资源提供科学依据。
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