羟苯磺酸钙胶囊不同含量测定方法的比较
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【摘要】 目的 建立UV吸收系数法和HPLC法测定羟苯磺酸钙胶囊的含量，并与文献方法进行比较。方法①UV吸收系数法:溶剂为水，测定波长为301 nm，吸收系数Ε1%1 cm为188(以C12H10CaO10S2计);②UV对照品法:溶剂为水，测定波长为301 nm;③铈量滴定法;④HPLC法:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，0.2%磷酸二氢钾?甲醇(体积比90∶10)为流动相;检测波长为301 nm。 结果 UV吸收系数法、UV对照品法和铈量滴定法3种方法的结果基本一致，HPLC法测定结果较其他3种方法的低。结论 HPLC法的可以有效分离可能存在的降解产物，比其他3种方法更能有效反映产品的真实质量，有利于产品的质量控制。
【关键词】 羟苯磺酸钙胶囊;高效液相色谱法;紫外吸收系数法
2,5?羟苯磺酸钙(羟苯磺酸钙)，是一种微循环血管改善剂，能选择性作用于毛细血管壁，调节和改善毛细血管的渗透性和脆性，主要用于各种原因引起的毛细血管疾病，是目前唯一防治糖尿病视网膜病变的有效药物。
目前，对本品的含量测定文献报道的有UV对照品法[1，2]和铈量滴定法[3]，本文建立UV吸收系数法和HPLC法用于本品的含量测定，并与文献方法进行比较分析，现将结果报道如下。
1 仪器与试药
日本岛津UV?2450紫外分光光度计，Waters2996 Series高效液相色谱仪,Mettler100型电子天平。羟苯磺酸钙对照品(质量分数：95.0%，批号：100573-200401，由中国药品生物制品检定所提供)，羟苯磺酸钙胶囊(批号：0705301、0705302、0705303，规格：500 mg，由国内某药厂提供)，对苯二酚(广州化学试剂厂)，甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾为分析纯。
2 UV吸收系数法
2.1 测定方法
取本品20粒内容物，精密称定，研细，混合均匀，精密称取适量(约相当于羟苯磺酸钙100 mg)，置100 mL量瓶中，加水适量振摇使溶解，并加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置200 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照紫外?可见分光光度法(中国药典2005年版二部附录Ⅳ A)，在301 nm的波长处测定吸光度;按C12H10CaO10S2的吸收系数为188[4]计算即得。
2.2 专属性考察
2.2.1 溶剂的选择 根据文献和试验，本品在水中极易溶解，故选用水为溶剂。
2.2.2 专属性与测定波长的选择 取羟苯磺酸钙对照品适量，加水溶解并稀释制成每1 mL中约含羟苯磺酸钙25 μg的溶液，照紫外-可见分光光度法，在250～350 nm的波长范围内扫描。另取空白辅料和胶囊壳，同法配置成空白辅料的水溶液，在200～350 nm的波长范围内扫描。图谱见图1。结果表明，羟苯磺酸钙在301 nm波长处有最大吸收;空白辅料和胶囊壳的水溶液在301 nm处无干扰吸收，不影响本品的测定。
2.3 线性试验
取供试品内容物适量，精密称定，用水制成每1 mL中含羟苯磺酸钙0.25 mg的溶液，分别精密量取1.0、3.0、5.0、7.0及10.0 mL，各置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，分别制成每1 mL中含羟苯磺酸钙5、15、25、35及50 μg的`供试品溶液，分别于301 nm波长处测定吸光度，以吸光度(A)对质量浓度(ρ)作线性回归，得回归方程：ρ=0.1236A+0.0229，r=0.999 7，n=5，表明羟苯磺酸钙的质量浓度在5～50 μg/mL范围内与吸光度线性关系良好。
2.4 回收率试验
取本品中各空白辅料，按处方比例配制，分别按标示量的80%、100%、120%加入羟苯磺酸钙对照品，加水适量配制成每1 mL中含羟苯磺酸钙20、25、30 μg的溶液各3份，在301 nm的波长处测定吸光度，计算，测得平均回收率为99.99%(RSD为0.12%，n=9)。
2.5 重复性试验
取同一批号(0705301)样品6份，按“2.1”项方法测定含量，结果分别为100.8%、101.2%、100.6%、101.3%、100.7%和100.9%，平均含量为100.9%，RSD为0.3%(n=6)。
2.6 稳定性试验
取供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10 h测定吸光度，吸光度基本不变，RSD为0.3%。
3 HPLC法
3.1 色谱条件
采用Kromasil C18柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)，以0.2%磷酸二氢钾?甲醇(体积比90∶10)为流动相，检测波长为301 nm。该色谱条件下，羟苯磺酸钙的理论板数为4800，保留时间约为10 min，对苯二酚的保留时间约为14 min。见图2。
3.2 专属性考察
3.2.1 酸降解产物的检测 取本品适量，加1 mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成约2 mg/mL的溶液，放置15 h，加1 mol/L氢氧化钠溶液中和后，进样，记录色谱图，见图3。
HPLC chromatogram of sample in acid solution
3.2.2 碱降解产物的检测 取本品适量，加1 mol/L氢氧化钠溶液溶解并稀释制成约2 mg/mL的溶液，放置15 h，加1 mol/L盐酸溶液中和后，进样，记录色谱图，见图4。
3.2.3 氧化产物的检测 取本品适量，加3%过氧化氢溶液溶解并稀释制成约1 mg/mL的溶液，放置4 h，进样，记录色谱图，见图5。
3.2.4 光降解产物的检测
取本品适量，加水溶解并稀释制成约1 mg/mL的溶液，置4 500 LX光照下照射24 h，进样，记录色谱图，见图6。
取本品适量，置4 500 LX光照下照射10 d，加水溶解并稀释制成约1 mg/mL的溶液，进样，记录色谱图，见图7。检测结果显示，各条件下的降解物质在该色谱条件下均能达到较好的分离。
3.3 线性试验
取供试品内容物适量，精密称定，用水制成每1 mL中含羟苯磺酸钙0.202 3 mg的溶液，分别精密量取1、5、10、20、35、50及100 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积(A)对进样量(m)作线性回归，得线性回归方程
m=1.4648×10-6A-0.03717，r=0.999 9(n=7)。
3.4 回收率试验
取本品中各空白辅料，按处方比例配制，分别按标示量的80%、100%、120%加入羟苯磺酸钙对照品，加水适量配制成每1 mL中含羟苯磺酸钙0.16、0.2、0.24 mg的溶液各3份，按“3.9”项方法测定，平均回收率为99.67%,RSD为0.41%(n=9)。